TRAP染色原理主要基于抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性。TRAP是破骨细胞的特异性标志酶，在含酒石酸的酸性条件下，TRAP能够将萘酚AS-BI磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI与偶氮副品红或fast red等显色剂结合，形成不溶性的红色沉淀。这种红色沉淀在酶活性部位沉积，从而实现对TRAP的显色和定位。

实验步骤：

1、石蜡切片脱蜡至水：依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-酒精Ⅲ5min，自来水漂洗。(冰冻切片直接自来水漂洗)。

2、染液：A液：醋酸缓冲液 B液：六偶氮副品红(临用前亚硝酸钠与副品红溶液等比例混合) C液：萘酚AS-BI磷酸酯液。 Trap染液配制：B液1ml+A液18ml+C液1ml混匀过滤，即为Trap染液。

3、孵育：将切片用组化笔化圈后放在（加有一定量的防止切片蒸干的纯水）湿盒中，用纯水37℃孵育2h。

4、染色：切片孵育完成后倾去纯水，滴加过滤好的TRAP工作液覆盖组织，置于37℃避光反应1h。

5、苏木素染细胞核：切片入苏木素染1-3min，自来水洗，盐酸水溶液分化数秒，自来水冲洗，氨水水溶液返蓝，流水冲洗。

6、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -正丁醇5min-二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

7、显微镜镜检，图像采集分析。

结果判读：破骨细胞胞浆呈酒红色，核浅蓝色。

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